ПЕРЕДОВЫЕ ТЕХНОЛОГИИ
МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ

В настоящее время в Диагностическом Центре медицинской академии подготовлена материально-техническая база и квалифицированные специалисты, что позволило внедрить в клиническую практику современный метод молекулярно-биологической диагностики - полимеразную цепную реакцию (ПЦР) в реальном времени (Real-Time PCR), основанную на количественном определении как ДНК, так и РНК инфекционных патогенов.

Известно, что метод ПЦР обладает уникальной аналитической чувствительностью и диагностической специфичностью. Кроме того, дополнительным преимуществом метода ПЦР является отсутствие высоких, как при микробиологических исследованиях, требований к условиям хранения и транспортировки клинического материала с целью сохранения жизнеспособности возбудителей. Вместе с тем, для "стандартной" ПЦР, основанной на использовании метода электрофореза на заключительном этапе исследования, существует один из существенных недостатков - высокий риск контаминации (загрязнения) продуктами ПЦР реактивов или клинического материала, вызывающей появление ложно-положительных результатов и других артефактов анализа.

Проблема контаминации в стандартном исполнении метода ПЦР была решена с помощью флуоресцентно-меченных олигонуклеотидных зондов (ФМ-зондов), которые добавляются в ПЦР-смесь и при появлении специфического продукта амплификации гибридизуются с ним, вызывая увеличение уровня флуоресцентного сигнала. Специально для этого были разработано оборудование, совмещающие в себе амплификатор и флюориметрический детектор. Метод позволяет регистрировать накопление специфического продукта амплификации либо непосредственно в процессе ПЦР ("ПЦР в реальном времени" (Real-Time PCR)), либо после окончания реакции ("анализ флуоресценции по конечной точке"). Причем в обоих случаях не предполагается пост-амплификационный анализ продуктов реакции методом электрофореза, чем достигается значительное снижение риска контаминации и связанных с ней ложно-положительных результатов и артефактов ПЦР.

Кроме того, еще больше увеличивается объективность в оценке результатов ПЦР-исследования, т.к. обработка полученных результатов осуществляется с помощью программного обеспечения, которым обеспечен флюориметрический детектор.

Принципиальная особенность метода Real-Time PCR заключается в возможности регистрировать накопление специфического продукта амплификации непосредственно в процессе ПЦР. Клиническое значение этого приема заключается в том, что кинетика накопления синтезированных олигонуклеотидов напрямую зависит от числа копий "оригинала исследуемой матрицы", что таким образом позволяет проводить количественную оценку содержания ДНК или РНК инфекционных агентов в исследуемом материале.

Таким образом, результаты исследования, полученные методом Real-Time PCR в большей мере, отвечает требованиям, предъявляемыми клиницистами для мониторинга эффективности проводимой терапии, и оценки клинического прогноза заболевания

Уже сейчас данный метод Real-Time PCR применяется в различных областях инфектологии, для прогноза заболевания и оценки эффективности проводимой терапии: вирусные гепатиты, ВИЧ-инфекция, герпетические инфекции и пр.

С использованием Real-Time PCR в диагностическом центре медицинской академии внедрена диагностика острых и хронических форм вирусных гепатитов В и С, что обеспечивает:

Для вирусного гепатита В:

1. Возможность ранней диагностики острого вирусного гепатита В, где ДНК вируса обнаруживаться в крови пациента в среднем на 20 дней раньше, чем HBsAg ("поверхностный" антиген) вируса гепатита В.

2. Возможность выявления мутантных штаммов вируса гепатита В.

3. Возможность количественной оценки уровня ДНК вируса гепатита В в плазме крови.

4. Возможность отслеживания активности вирусной репликации у здоровых "носителей" HBsAg. Так, содержание ДНК вируса гепатита В, так называемая вирусная нагрузка, более 100000 копий в 1 мм? крови характерно для хронического гепатита В.

5. Возможность контроля эффективности проводимой противовирусной терапии.

Для вирусного гепатита С:

1. Возможность установления факта инфицированности вирусом гепатитом С на 2-3 месяца раньше, чем при использовании метода ИФА, которым определяют наличие специфических противовирусных антител.

2. Возможность количественной оценки уровня РНК вируса гепатита С в плазме крови.

3. Возможность установления показаний к противовирусному лечению, прогноза её эффективности и выбора оптимальной схемы лечения.

4. Возможность своевременной оценки эффективности проводимого лечения.