Герпетическая инфекция

Современная  таксономия  семейства  Herpesviridae огромна и включает  в себя 80 видов вирусов, которые паразитируют в организме от устриц до человека. Герпес-вирусы имеют стабильные родовые  свойства, основными из которых являются  структура ДНК и механизмы инфицирования клеток хозяина. В настоящее время известно 8 патогенных для человека герпес-вирусов  (табл.3). Герпес-вирусная инфекция является наиболее  распространённой и может проявляться  в  разных     формах:  от пожизненной латентной персистенции до лимфопролиферативных  состояний. В связи с этим  любая герпесвирусная инфекция  лучше  всего характеризуется одним образным выражением: «однажды инфицирован – инфицирован на всю жизнь». Появляющиеся в ответ на внедрение вирусов герпеса специфические антитела зачастую не обеспечивают санацию организма от вирусов герпеса и не предупреждают рецидива заболевания. В связи  с этим перед практикующим врачом стоят задачи: составить наиболее адекватный план лабораторного обследования и правильно оценить полученные результаты. Необходимо помнить, что антитела к  большинству герпес-вирусов выявляются более чем у 90% людей старше 25 лет не имевших на момент обследования клиники каких-либо герпетических заболеваний. Вместе с тем, как указывалось выше, обнаружение  в сыворотке крови   ДНК какого-либо из  герпес-вирусов  не всегда означает дальнейшее развитие клинически манифестной инфекции или являться причиной имеющейся патологии. Поэтому врачу  крайне  важно провести дифференциальную диагностику  между состоянием «инфицированности» и  «болезни»,  вызванной каким-либо герпетическим  вирусом .

С этой целью лабораторные  исследования должны проводиться по  алгоритму:

• 1 этап: тестирование на наличие  противогерпетических антител класса М и G методом твердофазного ИФА, а также  определение ДНК методом ПЦР (кровь, ликвор, секреты слизистой).

• 2 этап: не ранее чем через две, а лучше через  три недели,  повторить обследование методом ИФА на  наличие вышеуказанных антител. Проведение ПЦР в этом периоде необходимо только в случае спорной клинической ситуации.

• 3 этап: обязательное обследование методом ПЦР для определения ДНК в сыворотке крови, ликворе  или другой биологической среде,  сроки которого определяются клинически и обычно зависят  от протокола лечения. Серологические исследования на данном  этапе носят второстепенный характер. Смысл такой последовательности заключается в том, что  первых два этапа позволяют установить этиологию и  характер инфекционного процесса (острая, хроническая или латентная формы). На третьем этапе, врач  осуществляет  прогноз инфекции,  и если назначалось лечение, то оценивает его эффективность. В этой фазе лечебно-диагностического процесса метод ПЦР играет ключевую роль, т.к. уровень специфических антител  не отражает степени  виремии, а стало быть, прогноз болезни  и  качество проведенной  терапии.  Остановимся на лабораторной диагностике  некоторых, наиболее  значимых  герпес-вирусов.

Вирус простого  герпеса 1 и 2 типов (ВПГ 1+2)

Лабораторная диагностика заболеваний, вызываемых  ВПГ 1+2 типов, включает в себя комплекс исследований, состоящий из выявления специфического иммунного ответа (антител),  определения вирусной ДНК  и вирусных белков (антигенов), а также подтверждение природы патогена культуральным  методом (по цитопатогенному эффекту вируса в  перевиваемой культуре клеток).

Серологические  тесты на  ВПГ, направленные  на выявление  антител против ВПГ 1+2, показали низкую диагностическую значимость из-за неоднозначности клинической трактовки. Это обусловлено тем, что у 97% - 100% обследованных клинически здоровых лиц обнаруживались указанные антитела. Нарастание титров антител к ВПГ происходит медленно в течение нескольких недель, при этом могут одновременно определяться специфические антитела класса М и  G.  Впоследствии антитела  к  ВПГ класса М могут циркулировать в крови в некоторых случаях от нескольких месяцев до нескольких лет. Этот феномен связывают с нарушением иммунитета у инфицированных ВПГ лиц. Кроме того, в случае реактивации  ВПГ  в крови  могут  вновь появиться специфические антитела класса М. С другой стороны, у иммуноскомпрометированных пациентов при рецидивах инфекции ВПГ  антитела к  вирусу (как  IgM, так и  IgG) могут не выявляться. Ложноотрицательный ответ на анти-ВПГ класса М может быть у новорождённых. Все выше перечисленное показывает на затруднительность  дифференцировки острой инфекции ВПГ от её реактивации.  Тем не менее, серологическое обследование необходимо проводить и делать это надо методом «парных» сывороток (с интервалом 14-21 день). Так, например, отсутствие в первой и появление во второй сыворотке  противогерпетических  IgM, или нарастание титров специфических IgG в 4 раза и более может быть показателем острой инфекции ВПГ. Таким образом, серологические тесты на наличие антител к ВПГ не могут служить единственным и надёжным критерием в постановке клинического диагноза.

Метод ПЦР в настоящее время является основным диагностическим способом в практическом здравоохранении для выявления ДНК вируса. При этом для выделения  ДНК ВПГ может быть использован любой биологический материал: клетки, биологические жидкости, ткани и т.п. В настоящее время разработаны методы количественного определения  вирусной ДНК в тестируемом образце. На основании полученных данных можно оценить форму инфекционного процесса. Так, если количество ДНК превышает 1000 копий геном-эквивалента (г/э) на 10  лейкоцитов периферической крови, это может свидетельствовать о развитии диссеминированной инфекции.

Цитомегаловирус (ЦМВ)

ЦМВ может быть причиной многих серьёзных заболеваний  с  летальным исходом. Темпы роста заражения ЦМВ составляют 1% в год, при этом к пятидесятилетнему  возрасту инфицированность  людей приближается к 100% показателю. Эти факты не позволяют однозначно ответить  на вопрос о степени патогенности вируса. С одной стороны, ЦМВ редко вызывает клинически манифестные заболевания  у иммунокомпетентных людей. С другой стороны, у иммунодефицитных  пациентов  отмечено развитие таких  ЦМВ-обусловленных   заболеваний, как мононуклеоз (гетерофильнонегативный вариант), хориоретинит, ретардация ментальных функций, глухота и т.п. Как и любая  другая герпетическая инфекция при первичном инфицировании ЦМВ возникает пожизненная латенция. Реактивация  ЦМВ-инфекции  зависит от состояния иммунной системы организма, срыв которой приводит к  возможности патологического влияния вируса на организм.

Лабораторная диагностика ЦМВ-инфекции включает в себя несколько подходов:

1. выявление инфекционных вирусных частиц или антигенов,
2. определение вирусной ДНК,
3. определение иммунного ответа организма,
4. выявление прямого цитопатического действия  вируса, выделенного из   в биологических субстратов пациента,  на перевиваемую культуру клеток.

Серологические тесты на ЦМВ являются основными для установления инфицирования данным вирусом. Однако это отнюдь не является основанием для заключения о том, что болезнь действительно вызвана ЦМВ. Показано, что высокие титры анти-ЦМВ-антител обнаружены как у здоровых носителей, так  и у  больных с острым течением инфекции. Селективное определение специфических антител  против ЦМВ класса М  и G также не позволяет с полной уверенностью дифференцировать острую инфекцию, от реактивации хронической. Поэтому определение вирусных антигенов и ДНК ЦМВ становится важным тестом для диагностики заболевания этим вирусом.

Метод ПЦР широко используется для диагностики  ЦМВ в любых биологических тканях и жидкостях, в том числе и биопсийном материале, фиксированном формалином. Этот метод превышает по своей чувствительности все имеющиеся аналоги. Для увеличения диагностической и прогностической значимости разрабатываются количественные методы исследования, создаются праймеры к сверхранним, ранним  и поздним  генам вируса. Кроме того, апробируются новые технологии ПЦР основанные на  определении  РНК-зависимой ДНК-полимеразы. Это позволит выявлять мРНК реплицирующегося  ЦМВ. Во многих работах показано, что прямая детекция ДНК ЦМВ в плазме методом ПЦР коррелирует с повышенным риском развития манифестной формы ЦМВ или связанными с ней осложнениями. Кроме того, определение вирусной нагрузки ЦМВ в крови позволяет оценить эффективность противовирусной терапии.

Вирус Эпштейна-Барр (ВЭБ)

Инфекция  названная так в честь  учёных Мишеля Эпштейна и Эвелины Барр, выделивших в 1964 г патоген из опухоли (лимфомы) Беркитта. ВЭБ широко распространённая инфекция, контаминация  которой происходит обычно в молодом возрасте. При этом ВЭБ-инфекция,  как и любая герпетическая инфекция, может протекать в форме первичного заражения или реактивации латентного процесса  (табл. 4) . Как видно из представленной  таблицы, ВЭБ - это потенциально онкогенная инфекция.

Лабораторная диагностика ВЭБ-инфекции базируется на цитологическом исследовании крови или костного мозга, серологических  исследованиях (определение гетерофильных и противовирусных антител) и ПЦР. Алгоритм лабораторной диагностики  представлен в таблице 5. Вирус ЭБ может быть обнаружен методом ПЦР в сыворотке  крови, слюне,  ткани опухоли и костном мозге. При этом важно сопоставление результатов клинических, серологических  и молекулярных обследований в определении ВЭБ-инфекции, как причины имеющегося заболевания.

Назад к содержанию